1. 環糊精的選擇與預處理：根據具體需求選擇合適的環糊精類型，如 α-、β-、γ- 環糊精等，其中 β- 環糊精應用較為廣泛。若環糊精本身不含有可與 FITC 反應的活性基團，需先對其進行化學修飾，引入如氨基等活性基團。例如，可通過將環糊精與氨基修飾劑（如氨基乙基化試劑）反應，在環糊精分子上引入氨基.

2. FITC 溶液的配制：通常將 FITC 溶解在適當的溶劑中，如無水二甲基亞砜（DMSO）或磷酸鹽緩沖液（PBS）等，配制成一定濃度的溶液，一般濃度為 1mg/ml 左右，且需現用現配，以防止 FITC 分解失效.

3. 反應條件的確定：將含有活性基團的環糊精溶液與 FITC 溶液混合，反應一般在弱堿性條件下進行，pH 值通常控制在 8-9 左右，如 pH 8.5 時反應效率和穩定性較好。同時，反應可在室溫或較低溫度下進行，如 4℃左右，以避免溫度過高導致副反應增加.

4. 反應過程：在避光條件下，將 FITC 溶液緩慢地逐滴加入到環糊精溶液中，邊加邊輕輕攪拌，使二者充分混合均勻，然后在選定的溫度和 pH 條件下進行孵育反應。反應時間根據具體情況而定，一般需要數小時至數十小時不等，例如 8-12 小時，也可通過設置不同的時間梯度進行預實驗，以確定最佳反應時間.

5. 反應終止與純化：反應結束后，需加入適量的終止劑終止反應，如氯化銨等，使反應體系中的未反應 FITC 失活。然后可采用透析法、凝膠過濾色譜法、高效液相色譜法等對標記產物進行純化，以去除未反應的 FITC、環糊精以及其他雜質，得到高純度的 FITC - 環糊精.

6. 產物鑒定與檢測：使用熒光光譜儀對純化后的 FITC - 環糊精產物進行熒光檢測，激發波長一般為 490 - 495nm，發射波長為 515 - 525nm，觀察其熒光強度和光譜特征是否符合預期，以確定標記是否成功以及標記效率的高低 。此外，還可結合其他分析方法，如高效液相色譜（HPLC）、質譜（MS）等對標記產物的純度、結構等進行進一步的鑒定和分析，以確保獲得高質量的 FITC - 環糊精標記產物.

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