呋塞米的合成

1. 氯磺化：將氯磺*和 2,4 - 二氯苯甲酸在 100-155℃溫度下反應 2-6h，然后將反應物加入水中進行水解，水解液過濾，濾餅用水洗至中性，得到 2,4 - 二氯 - 5 - 磺酰氯苯甲酸。

2. 胺化：將 2,4 - 二氯 5 - 磺酰氯苯甲酸加入氨水中，在 0-50℃下反應 2-4h，中和，過濾，得到 2,4 - 二氯 - 5 - 磺酰胺基苯甲酸粗品，再將其加入乙醇水溶液中，在 40-80℃保溫 0.5-2h，降溫重結晶，干燥，提純得到 2,4 - 二氯 - 5 - 磺酰胺基苯甲酸。

3. 縮合：將 2 - 呋喃甲胺和 2,4 - 二氯 - 5 - 磺酰胺基苯甲酸在 80-150℃下反應 5-12h，將反應物加入到氫氧化鈉水溶液中，再用有機溶劑洗滌，中和，析出結晶，得呋塞米粗品。

4. 脫色：將呋塞米粗品加入碳酸氫鈉飽和溶液中，升溫至 70-100℃，再加入活性炭脫色，然后中和，結晶，離心，即得呋塞米產品。

FITC 與呋塞米的偶聯

1. 溶解：分別將 FITC 和呋塞米溶解在合適的溶劑中，如二甲基亞砜（DMSO）或 N,N - 二甲基甲酰胺（DMF）等有機溶劑，制成一定濃度的溶液。

2. 反應：在適當的反應條件下，將 FITC 溶液緩慢滴加到呋塞米溶液中，同時不斷攪拌，通常需要在堿性條件下進行反應，可加入適量的堿，如三乙胺等，以促進反應的進行。反應溫度一般控制在室溫或較低溫度下，反應時間可能需要數小時甚至更長，具體取決于反應的規模和效率。

3. 純化：反應結束后，需要對產物進行純化，以去除未反應的 FITC、呋塞米以及其他雜質。常用的純化方法包括柱層析、凝膠過濾、透析等，通過這些方法可以得到較純的 FITC - 呋塞米產物。

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