1.物理混合法
步驟：
溶解 DOPE：將 DOPE 溶解在合適的有機溶劑中，常用的有機溶劑有氯仿或二氯甲烷。例如，在通風良好的通風櫥中，將適量的 DOPE（如 10 - 100mg）加入到裝有 1 - 10mL 氯仿的玻璃容器中，使用磁力攪拌器攪拌，直至 DOPE 全溶解，得到澄清的 DOPE 溶液。
溶解 ICG：同時，將 ICG 溶解在適當的溶劑中。由于 ICG 在水中溶解度較低，通常選擇二甲基亞砜（DMSO）或 N,N - 二甲基甲酰胺（DMF）作為溶劑。例如，將一定量的 ICG（如 1 - 10mg）加入到 0.1 - 1mL 的 DMSO 中，超聲處理數分鐘，使其全溶解，形成 ICG 溶液。
混合溶液：在溫和攪拌的條件下，將 ICG 溶液緩慢滴加到 DOPE 溶液中。滴加過程要緩慢，以確保 ICG 能夠均勻地分散在 DOPE 溶液中。例如，使用滴管逐滴加入 ICG 溶液，同時保持攪拌速度在 100 - 500rpm 左右。
去除溶劑：將混合溶液轉移到旋轉蒸發儀中，在適當的溫度（如 30 - 50℃）和真空條件下旋轉蒸發，去除有機溶劑。隨著溶劑的蒸發，DOPE 和 ICG 會逐漸聚集形成復合物。當溶劑基本去除后，可得到含有 DOPE - ICG 復合物的固體或半固體物質。
水化復合物：為了得到適合生物應用的 DOPE - ICG 制劑，需要對上述固體或半固體物質進行水化。加入適量的緩沖液（如磷酸鹽緩沖液，pH 7.2 - 7.4），緩沖液的體積可根據所需復合物的濃度來確定，一般為 1 - 10mL。然后通過超聲處理或溫和攪拌，使 DOPE - ICG 復合物均勻地分散在緩沖液中，形成穩定的膠體溶液。
2.化學偶聯法
3.步驟：
修飾反應物（如果需要）：首先檢查 DOPE 和 ICG 的化學結構，確定合適的反應基團。如果反應基團需要活化或修飾，要提前進行相應的化學處理。例如，對于含有羧基的 ICG，可以通過與 NHS 反應生成活性酯，使其更容易與氨基反應。
溶解反應物：將 DOPE 和 ICG 分別溶解在合適的反應溶劑中。常用的反應溶劑為緩沖液，如 MES 緩沖液（pH 5.5 - 6.5）或磷酸鹽緩沖液（pH 7.0 - 7.4），以提供合適的反應環境。例如，將 DOPE 和 ICG 分別溶解在不同的緩沖液中，濃度可根據反應的化學計量比來確定，一般為 0.1 - 10mM。
添加偶聯試劑：在攪拌的條件下，向反應體系中依次加入偶聯試劑 EDC 和 NHS。EDC 和 NHS 的用量要根據 ICG 和 DOPE 上反應基團的摩爾數來確定，一般 EDC 過量 1.2 - 1.5 倍，NHS 過量 1 - 1.2 倍。例如，若 ICG 的羧基摩爾數為 1mmol，可加入 1.2 - 1.5mmol 的 EDC 和 1 - 1.2mmol 的 NHS。
進行反應：將反應體系在適當的溫度（如室溫或 4 - 10℃）下反應數小時至過夜。反應過程中可以通過薄層色譜（TLC）或高效液相色譜（HPLC）來監測反應進程。例如，對于反應較慢的體系，可以在室溫下反應 24 - 48 小時，期間每隔一段時間取樣進行 TLC 或 HPLC 分析，觀察反應物和產物的變化。
產物純化：反應結束后，需要對產物進行純化，以去除未反應的反應物、偶聯試劑和副產物。常用的純化方法有柱層析、透析和超濾等。例如，采用柱層析法，選擇合適的固定相（如硅膠柱）和流動相（如不同比例的有機溶劑和緩沖液混合液），根據產物和雜質的極性差異進行分離，得到純凈的 DOPE - ICG 偶聯物。
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2025-01-16
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